Biuret法測定蛋白質(zhì)含量逐漸隱退的原因分析
來源： http://m.10xin10yi.com/ 類別：實用技術(shù) 更新時間：2015-03-16 閱讀次
蛋白質(zhì)含量測定法，是生物化學(xué)研究中最常用、最基本的分析方法之一。蛋白質(zhì)的測定在不斷的更新以及替換，但是不論時代如何的進(jìn)步，蛋白質(zhì)測定儀就有四種較為經(jīng)典的檢測 方法，凱氏定氮法（可以直接使用自動型凱氏定氮儀來進(jìn)行替代），雙縮尿法（Biuret法 ）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。這四種方法是即經(jīng)典又傳統(tǒng)的檢測方法 ，四種方法中Lowry法靈敏度最高，比紫外吸收法靈敏10～20倍，比Biuret法靈敏100倍以上。即使這樣在日常過程中時常會使用凱氏定氮儀測定的結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，其中雙縮尿法測定蛋白質(zhì)含量慢慢的退出檢測市場，究竟是何愿意促使的呢？
雙縮脲法是傳統(tǒng)的分光光度法測定蛋白質(zhì)的方法。在進(jìn)行測定的時候，必須預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液制作一個標(biāo)準(zhǔn)校正曲線，通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液加入雙縮脲試劑后，反應(yīng)生成的顏色產(chǎn)物用紫外-可見分光光度計在540nm波長下測定吸光度，以雙縮脲試劑加緩沖或水作空白對照。然后將測得的值分別對蛋白濃度(mg/ml)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知蛋白樣品用雙縮脲試劑做同樣處理，根據(jù)測得吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接查得未知蛋白質(zhì)樣品中得蛋白質(zhì)濃度。
此方法對各種蛋白質(zhì)呈色基本相同；特異性和準(zhǔn)確度好，精密度好；呈色穩(wěn)定性好，試劑單一，方法簡便，但靈敏度不高，約為1mg，故現(xiàn)在已很少使用。在進(jìn)行測定的過程中，樣品的取用量的多少直接影響著測定的結(jié)果準(zhǔn)確度，同時測量的穩(wěn)定性遠(yuǎn)比使用凱氏定氮儀來得低很多。即使這種方法使用的人比較的少，但是這種檢測方法仍然沒有完全的退出這 個市場，在某些領(lǐng)域中依舊使用這種個方法進(jìn)行測定。
雙縮脲法是傳統(tǒng)的分光光度法測定蛋白質(zhì)的方法。在進(jìn)行測定的時候，必須預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液制作一個標(biāo)準(zhǔn)校正曲線，通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液加入雙縮脲試劑后，反應(yīng)生成的顏色產(chǎn)物用紫外-可見分光光度計在540nm波長下測定吸光度，以雙縮脲試劑加緩沖或水作空白對照。然后將測得的值分別對蛋白濃度(mg/ml)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知蛋白樣品用雙縮脲試劑做同樣處理，根據(jù)測得吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接查得未知蛋白質(zhì)樣品中得蛋白質(zhì)濃度。
此方法對各種蛋白質(zhì)呈色基本相同；特異性和準(zhǔn)確度好，精密度好；呈色穩(wěn)定性好，試劑單一，方法簡便，但靈敏度不高，約為1mg，故現(xiàn)在已很少使用。在進(jìn)行測定的過程中，樣品的取用量的多少直接影響著測定的結(jié)果準(zhǔn)確度，同時測量的穩(wěn)定性遠(yuǎn)比使用凱氏定氮儀來得低很多。即使這種方法使用的人比較的少，但是這種檢測方法仍然沒有完全的退出這 個市場，在某些領(lǐng)域中依舊使用這種個方法進(jìn)行測定。
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