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醋酸纖維素薄膜電泳解析

來源: http://m.10xin10yi.com  類別:實用技術  更新時間:2015-03-23  閱讀

  醋酸纖維素薄膜是由醋酸纖維素加工制成的。醋酸纖維素薄膜作為是電泳支持體有以下優點:①電泳后區帶界限清晰;②通電時間較短(二十分鐘至一小 時);③它對各種蛋白質(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都幾乎完全不吸附,因此無拖尾現象;④對染料也沒有吸附,因此不結合的染料能完全洗 掉,無樣品處幾乎完全無色。它的電滲作用雖高但很均一,不影響樣品的分離效果,由于醋酸纖維素薄膜吸水量較低,因此必需在密閉的容器中進行電泳,并使用較低有電流避免蒸發。

  醋酸纖維素薄膜電泳已經廣泛用于血清蛋白,血紅蛋白,球蛋白,脂蛋白,糖蛋白,甲胎蛋白,類固醇及同工酶等的分離分析中,盡管它的分辨力比聚丙酰胺凝膠電泳低,但它具有簡單,快速等優點。根據樣品理化性質,從提高電泳速度和分辨力出發選擇緩沖液的種類,pH 和離子強度。選擇好的緩沖液最好是揮發性強,對顯色或紫外光等觀察區帶沒有影響,若樣品含鹽量較高時,宜采用含鹽緩沖液。例如血清蛋白電泳可選用 pH8.6 的巴比妥緩沖液或硼酸緩沖液;氨基酸的分離則可選用 pH7.2 的磷酸鹽緩沖液等。電泳時先將濾膜剪成一定長度和寬度的紙條。在欲點樣的位置用鉛筆做上記號,點上樣品,在一定的電壓,電流下電泳一定時間,取下濾膜,進行染色。不同物質需采用不同的顯色方法,如核苷酸等物質可在紫外分析燈下觀察定位,但許多物質必須經染色劑顯色。

  醋酸纖維素薄膜電泳染色后區帶可剪下,溶于一定的溶劑中進行光密度測定。也可以浸于折射率為 1.474 的油中或其他透明液中使之透明,然后直接用光密度計測定。它的缺點是厚度小,樣品用量很小,不適于制備。

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